水中總氮空白值居高不下怎么辦？

總氮（TN）是衡量水質(zhì)的一個重要指標(biāo)之一。其測定有助于評價水體被污染和自凈狀況。地表水中氮、磷物質(zhì)超標(biāo)時，微生物大量繁殖，浮游生物生長旺盛，出現(xiàn)富營養(yǎng)化狀態(tài)。總氮的定義是水中各種形態(tài)無機(jī)和有機(jī)氮的總量。包括NO3-、NO2-和NH4+等無機(jī)氮和蛋白質(zhì)、氨基酸和有機(jī)胺等有機(jī)氮，以每升水含氮毫克數(shù)計算。常被用來表示水體受營養(yǎng)物質(zhì)污染的程度。

水質(zhì)總氮的測定方法主要有堿性過硫酸鉀紫外分光光度法（HJ 636-2012），氣相分子吸收光譜法，氨氮、硝酸根分別測定方法等，而堿性過硫酸鉀紫外分光光度法在環(huán)境地表水、水質(zhì)檢測領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

在使用過硫酸鉀消解測試總氮的時候，不知道小伙伴們有沒有為空白值不穩(wěn)定而苦惱？HJ 636-2012中規(guī)定了每批樣品應(yīng)至少做一個空白實驗，且要求空白試樣的校正吸光度Ab應(yīng)小于0.030。有些小伙伴有時會忽略0.030的要求，當(dāng)空白值大于0.030時，則直接用測試值減去空白值進(jìn)行計算，這樣的方法，對低氮含量的測試的準(zhǔn)確性影響是非常大的。
說到校正吸光度，我們先來看一下校正吸光度的公式：
A_b＝A_b220-2A_b275

堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法測定總氮的原理是：利用過硫酸鉀的氧化性，將水樣中的氨氮、亞硝酸鹽氮及大部分有機(jī)氮化合物氧化為硝酸鹽。硝酸根離子在220nm波長處有吸收，而溶解的有機(jī)物在此波長下也有吸收；在275nm波長處，有機(jī)物有吸收而硝酸根離子沒有吸收，所以利用兩個波長下的吸光度對硝酸鹽氮值進(jìn)行校正，公式中2倍Ab275為溶解在水中有機(jī)物在220nm和275nm處吸光度的經(jīng)驗系數(shù)。

那么，具體有哪些因素會影響到空白吸光度呢？通過大量客戶實驗中的“慘痛教訓(xùn)”，我們?yōu)榇蠹铱偨Y(jié)了過硫酸鉀空白值不穩(wěn)定的幾點原因：

1.所用試劑部分過硫酸鉀合成過程以硫酸銨為原料，這也是導(dǎo)致空白值高于0.030的一個原因，因此，需使用符合國標(biāo)要求的試劑，即總氮小于0.0005%的過硫酸鉀和氫氧化鈉。市售過硫酸鉀質(zhì)量參差不齊，很多過硫酸鉀只標(biāo)注了純度，而沒有總氮指標(biāo)。我們對同一品牌過硫酸鉀的不同批次，以HJ?636-2012附錄A中的方法測試挑選了含量為0.001%和0.0005%的過硫酸鉀，并配制成堿性過硫酸鉀溶液進(jìn)行空白測試：結(jié)果表明，雖然兩種過硫酸鉀空白值相差不大，但總氮含量越低，空白值也相應(yīng)降低。同時由于總氮測試方法不同，由不同方法得到的過硫酸鉀總氮值略有差異，建議在實驗前先以HJ?636-2012中條件做空白實驗，以驗證過硫酸鉀是否符合要求。

2.消解時間HJ?636-2012中規(guī)定了消解時間為30min，自然冷卻并開閥放氣，將比色管冷卻至室溫再進(jìn)行后續(xù)操作。經(jīng)實驗測試，過硫酸鉀和氫氧化鈉本身在220nm處也有較強(qiáng)的吸收，自然冷卻可以讓高壓滅菌器中溫度在一段時間內(nèi)繼續(xù)保持在一個相對較高的水平，以此保證過硫酸鉀完全反應(yīng)，否則殘留的過硫酸鉀便會對空白值產(chǎn)生影響。而我們在實驗中，可以適當(dāng)將消解時間延長至40min，以保證過硫酸鉀完全反應(yīng)。

3.其他因素HJ?636-2012中使用的玻璃器皿也會對總氮測試空白值產(chǎn)生影響，當(dāng)空白比色管在有氨污染的環(huán)境下存放一段時間，空白吸光度也會受到影響。建議每次使用完畢后，用1+9的硫酸溶液浸泡比色管（消解氮含量高的樣品后，可使用1+3硫酸溶液浸泡），并用無氨水沖洗干凈再使用。高壓滅菌器在工作中為完全密閉狀態(tài)，但其中的水分會在高壓下蒸發(fā)，因此其清潔程度也會對空白值造成影響，經(jīng)常消解高氮源的實驗室，需定時清洗高壓滅菌器并換水，以保證每批次處理的試樣的準(zhǔn)確性不受干擾。